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    園區核心設施

    NBRP Core Facilities

園區核心設施 - 生醫轉譯研發團隊的後盾 園區核心設施,已開放對外服務,歡迎產學研單位申請使用

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高階多維度影像分析平台

介紹:

高階多維度影像分析平台是由一系列全光譜的共軛焦顯微鏡及單分子影像系統所組成。共軛焦顯微鏡利用針孔(pinhole)原理,去除非焦平面之雜光,提供清晰高解析度之型態觀察。由於光學技術之發展加上全光譜雷射及多光子雷射之運用,使得影像取得的範圍由一般細胞型態及螢光標定蛋白質,擴展到微觀之分子結構層級及巨觀之深層組織。透過物理現象(壓制雷射)或隨機光學重建運算方式,現今之光學系統可以提供到50奈米之超高解析度影像。

本平台備有各式高階共軛焦顯微鏡及超高解析度影像設施,可呈現從窺視單分子結構, 細胞內部胞器到多維度空間大組織結構. 倒立型共軛焦顯微鏡搭配完整的活細胞觀察系統( Zeiss LSM880 AiryScan)。正立型共軛焦顯微鏡搭配多光子光倍頻系統(Leica DIVE)提供組織深層高解析觀察解決共軛焦顯微鏡所無法提供深層影像的問題,而其可調式之多光子系統更解決過去非可調式系統使用上之難度。白光雷射倒立型共軛焦顯微鏡(Leica STED 3X)可提供光學式之超高解析度影像,可以進階至分子層次的影像。紅外光超高解析單分子即時定位顯微影像分析系統 (MetaMorph Infrared Real-Time STORM)則提供數位運算之超高解析分子影像。

高階多維度影像分析平台系統照片

服務項目:

  1. 委託專案服務
  2. 專人操作服務
  3. 儀器自行操作
  4. 諮詢與教育訓練服務

開放時間:

週一至週五 09:00~17:00

 

預約系統表單下載:

使用管理辦法

使用注意事項

使用聲明書

正立型共軛焦顯微鏡

型號:

Deep In Vivo Explorer/TCS SP8 intravital MP/DM6

儀器規格:

  • 電動正立顯微鏡(DM6 CFS flex)

  • SP8 Scanner

  • 兩組共軛焦顯微鏡專用PMT感測器

  • 兩組HyD DIVE 4Tune專用

  • 雷射系統: 405, 458, 488, 514, 561, 594, 及633nm

  • 多光子雷射系統: 可調式雷射660-1320nm, 固定波長1040nm

  • 物鏡: 10x, 20x Imm Corr, 25x(IR專用水鏡, NA 1.0, 工作距離: 2.6mm), 40x oil, 63x oil, 100xoil

  • 電動載物台

  • 軟體: :LAS X SP8 軟體

樣品形式:

  • 多光子共軛焦掃描:厚組織樣品 

  • 單光子共軛焦掃描:澄清化厚組織樣品或透明樣品(如:透明斑馬魚,細胞層級等)

多光子共軛焦特色:

  • 增加取樣的深度, 能更深⼊樣品裡層
  • 不會產⽣光毒傷害
  • 減低螢光漂⽩的速率, 增加螢光觀察與掃描時間
  • 適⽤⻑時間擷取記錄
  • 較容易將激發光與釋出光的波⻑分開, 螢光影像⽐較不會有重疊現像 ( cross-talk )
  • 無須感測光針孔(pinhole), 反射螢光可 100% 的被感測
  • 可使⽤於活體細胞, ⽽不會造成傷害

儀器特色

       DIVE為全球第一套全光譜自由多色、多光子深度活體影像系統。可調式層光倍頻雷射之系統,可做共軛焦顯微鏡與組織深層之穿透掃描。經過特殊閃電(Lightning)運算方式,解析度亦可達30-40奈米。調式雷射激發光與最新型可調光束擴展器 (VBE):可靈活調整光束聚散,在解析力及觀察深度取得絕佳平衡。

使用注意事項:

  • 建議使用1.5H (0.17mm) 蓋玻片
  • 使用多光子專用25x 水鏡, mounting medium最好是PBS 或水

儀器放置位置:國家生技園區 A棟 5樓 502b

儀器照片:

正立型共軛焦顯微鏡儀器照片

原廠連結

 

倒立型共軛焦顯微鏡

型號: Carl Zeiss LSM880 AiryScan

儀器規格:

  • 倒立顯微鏡 (Axio Observer 7 SP)

  • 活細胞觀察系統: 全罩式細胞培養箱, 加熱控制器, 二氧化碳控制器, 氧氣控制器, 濕度控制用加熱器

  • 雷射系統: 405nm, 458nm, 488nm, 514nm, 561nm, 594nm, 及633nm

  • 螢光濾片: DAPI, CFP, EGFP, YFP及TexasRed

  • 物鏡: 5x, 10x (DIC), 20x (DIC), 25x (DIC) 甘油鏡, 40x, 63x (DIC)油鏡, 及100x (DIC)油鏡

  • 感測器: 兩組光電倍增管(PMT), 一組32 channels 磷砷化鎵 (GaAsP) 高感度感測器, 一組Airyscan (GaAsP)高感度感測器

  • 超高解析度突像擷取裝置(Airyscan)

  • DIC 浮雕相位差觀察模式

  • 電動載物台

  • 離線分析軟體 ZEN 2.3

應用說明:

  • 多色超高解析度觀察

  • 多點位置應用及樣品大面積拼圖

  • 光譜分析功能

  • 弱螢光影像

  • 螢光共振能量轉移(FRET)

  • 螢光漂白恢復術(FRAP)及光漂白螢光損失(FLIP)實驗

使用注意事項:

  • 建議使用1.5H (0.17mm) 蓋玻片
  • 建議使用Confocal專用玻璃底培養皿
  • 若須使用Airyscan超高解析度突像擷取,請使用精度高之蓋玻片或玻璃底培養皿
  • 活細胞長時間培養觀察,可使用玻璃底培養皿或24 wells 培養皿

儀器放置位置:國家生技園區 A棟 4樓 407a

儀器照片:

倒立型共軛焦顯微鏡儀器照片

原廠連結

 

 

白光雷射倒立型共軛焦顯微鏡

型號:

  • Leica gSTED (Stimulated Emission Depletion Microscope, 3D/Two Depletion Lasers System)
  • Leica TCS SP8X (WLL Confocal Spectral Microscope)

儀器規格:

  • 全自動倒立式螢光顯微鏡 (Leica DMI 6000)
  • 共軛焦/STED專用高解析物鏡: 10x, 20x Imm Corr, 40x oil, 63x oil, 100xoil
  • 電動載物台
  • 掃描器: SP8 Scanner Head
  • 感測器: 兩組光電倍增管(PMT), 兩組光譜型偵測器(HyD)
  • 白光雷射系統: 470-670nm 連續可調
  • LightGate偵測技術
  • 3D gSTED 模組
  • 雙STED壓制雷射系統(Depletion laser): 592nm, 660nm

應用說明:

  • Sequential Scan
  • 超高解析度(Superresolution)
  • FRAP, FRET
  • 共位觀察 (Colocalization)

儀器特色:

        STED顯微鏡應用壓制雷射型成donut以壓制螢光,產生比共軛焦影像更高的解析度,gated STED可提升光學解析力至50nm以下,是唯一不經運算之純光學超高解析技術。STED技術中, 解析度可隨壓制雷射之強度. 壓制雷射強度越強,可達到越高的解析度, 搭配Light gate技術移除雜訊, 同樣雷射強度下解析度可提升1.4倍.

              STED原理圖片

使用注意事項:

  • 適用染劑:  /uploads/ckeditor/attachments/289/STED_Dye_list.pdf
  • 建議使用:# 1.5 coverslip, 18 mm2 coverslip, #1.5 in 6 wellplate, or 8 mm2 coverslip, # 1.5 (EMS, # 72296-08), in 24 wellplate
  • 使用STED功能需避免會受592nm雷射激發之染劑, 例如DAPI或HOECHST等(DAPI可使用TO-PRO-3, YOYO-3, DRAQ 5替代)

儀器放置位置:國家生技園區 A棟 4樓 407b

儀器照片:

白光雷射倒立型共軛焦顯微鏡儀器照片

原廠連結

 

紅外光超高解析單分子即時定位顯微影像分析系統 (Infrared Real-Time Stochastic Super-Resolution System)

儀器規格:

  • 機身: Nikon Ti-E
  • 物鏡: 10x, 20x, 60x oil
  • 濾片: DAPI, FITC, TRITC, TEXAS
  • 二階能量式LED燈 (SOLA II light engine): 380-680nm
  • 相機: Andor iXon Ultra 888BV Back illuminated deep-cooled EMCCD camera
  • 雷射系統: 405nm, 488nm, 561nm, 637nm, 967nm
  • 軟體:MetaMorph Super-Resolution software

應用說明:

  • 單分子3D超解析取像
  • 單分子追蹤( single molecule Tracking)

儀器特色:

       Stochastic optical reconstruction microscopy (STORM)又稱Single Molecule Localization Microscopies (SMLM)超解析影像,XY向解析力可達到20nm; Z向解析力可達到40nm。搭配自動雷射回饋校正及drift軟體校正功能,讓超解析取像使用更加便利。

使用注意事項:

原理說明: https://www.microscopyu.com/tutorials/stochastic-optical-reconstruction-microscopy-storm-imaging

儀器放置位置: 國家生技園區 A棟 4樓 407c

儀器照片:

 

原廠連結 

專案經理: 黃建彰 博士

E-mail: cchuang0418@gate.sinica.edu.tw

管理人員: 王儷霖 技術專員

E-mail: lilywang@gate.sinica.edu.tw